T4 Polynucleotide Kinase, Cloned

T4 Polinükleotid Kinaz (PNK), p-fosfatın ATP’den ssDNA’nın 5 ‘hidroksiline ve dsDNA, RNA ve nükleozit 3′ monofosfatlarına transferini katalize eder. Enzim ayrıca 3′-hidroksil grubu oluşturmak için 3’-fosforil polinükleotitler, deoksiribonükleosit 3 ‘monofosfatlar ve deoksiribonükleosit-3′, 5’-difosfatlardan 3 ‘fosfatı giderir.

Uygulamalar

DNA sekansı, blot-hibridizasyon deneyleri veya Mung Bean Nuclease, S1 nükleaz veya diğer nükleazlar kullanılarak transkript eşleştirmesi için 32P veya 33P ile 5 ‘DNA ve RNA terminallerinin etiketlenmesi.
Ligasyondan önce oligonükleotid bağlayıcıların ve diğer DNA veya RNA moleküllerinin fosforilasyonu veya Ampligase® Termostabil DNA Ligazı ile ligasyon amplifikasyon reaksiyonlarında kullanım.
Jel elektroforezi ve kromatografisi için etiketli DNA veya RNA moleküler ağırlık markörlerinin hazırlanması.
Birim Tanım: Bir birim T4 Polinükleotid Kinaz, standart deney koşulları altında 37 ° C’de 30 dakika içinde [γ-32P] -ATP’den bir asit çözünmeyen forma 1 nmol 32P’yi dönüştürür.

Depolama Tamponu: 50 mM Tris-HCl (pH 7.5), 0.1 M NaCI, 0.1 mM EDTA,% 0.1 Triton® X-100 ve % 50 gliserol içeren 1 mM DTT.

T4 PNK 10X Tepkime Tamponu: 330 mM Tris-asetat (pH 7.5), 660 mM potasyum asetat, 100 mM magnezyum asetat ve 5 mM DTT. Nonizotopik uygulamalar için 10 mM’lik bir ATP çözümü ayrıca mevcuttur.

Kalite Kontrol: T4 PNK, nükleik asitlerin 5 ‘fosforilasyonunda test edilir ve saptanabilir ekso- ve endonükleaz ve RNaz aktivitelerinden arındırılmıştır.

ATP’siz 10X Reaction Buffer içerir. ATP ayrıca temin edilebilir.